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《吸血鬼骑士》根据由漫画家樋野茉理所绘画的同名少女漫画所改编。 黑主学院是一所有名的私立学校，分为普通部和夜间部。夜间部人员都是有超美型的精英学员。但他们有个特殊的身份：吸血鬼！并且这个身份不能让普通部学生知道。理事长的义女——普通部学生的黑主优姬，以及青梅竹马的锥生零担负起学院守护者的职责——处理人类学生与吸血鬼接触时所出现的麻烦。而在零的内心深处，因为4年前父母被杀害而痛恨着所有吸血鬼。 十年前的一个雪夜优姬迷路遭遇恶鬼，幸得贵族吸血鬼玖兰枢所救。十年后，两人在黑主学院再次相遇。对于救过自己性命的枢，优姬心中存着感激与仰慕，枢虽对优姬有好感，但却因种族间的鸿沟刻意远离。而零虽对优姬也有感觉，但坚硬的内心却阻止了他的感情。等待着他们的命运到底是什么......
时值大正十二年，东京的夜晚，那些将会出现。他们是潜藏在黑暗中，啜饮人类鲜血的吸血鬼，在更久远的时代就隐身居住在这个世界。陆军内部创设了第十六特务队来管理他们，通称「零机关」。 这个部队是中岛中将为了对抗近代化列强诸国的情报战而创设，但眼下零机关的任务，是对应暗藏在东京的吸血鬼事件。被分配到此项工作的是──最强人类的前田义信大佐，国内等级最高的吸血鬼且机关新人栗栖秀太郎，智力是规格外的山上德一，从江户时代就存在至今的须和（暂译，原文スワ），喜爱未衰老大脑的疯狂科学家竹内（暂译，原文タケウチ）。 ──以上，是零机关实行部队的成员。 不断增加的吸血鬼们，暗中行动的影子，神秘人工血液的存在，冷眼静观这些事态的是，虽然年龄超过300岁，外表却与小孩无异的S等级吸血鬼戴夫罗特（暂译，原文デフロット）。 零机关今日，穿梭于大正浪漫的夜晚之中。
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